別添１
新

旧

ラムの色調を記録する場合は，基準となる色見本を同時
に撮影することが望ましく，十分な解像度を持つイメー
ジスキャナを用いることもできる．なお，365 nm照射に
よる蛍光スポットの記録時には，目視で確認できる色調
と記録の色調が異なる場合があることから，注意を要す
る．デンシトメトリーを用いる薄層クロマトグラフィー
用走査装置は，紫外線による吸収，可視光による吸収又
は励起光による蛍光を展開した薄層板上で測定し，得ら
れたクロマトグラムをピーク情報に変換して記録・保存
する．ピーク情報に変換されたデータは定量的な解析に
使用される．
2. 操作方法
別に規定するもののほか，通例，次の方法による．

2. 操作法
別に規定するもののほか，次の方法による．

(ⅰ) 試料溶液のスポット：医薬品各条に規定する試料溶

薄層板の下端から約20 mmの高さの位置を原線とし，

液及び標準溶液を調製し，規定する容量を薄層板の原線

左右両側から少なくとも10 mm離し，原線上に医薬品各

上にスポットする．薄層板の下端から約20 mmの高さの

条に規定する量の試料溶液又は標準溶液を，マイクロピ

位置を原線とし，試料溶液及び標準溶液などを左右両側

ペットなどを用いて約10 mm以上の適当な間隔で直径2

から少なくとも10 mm離しスポットした位置を原点とす

～ 6 mmの円形状にスポットし，風乾する．次に別に規

る．定容量の毛細管，マイクロシリンジ，マイクロピペ

定するもののほか，あらかじめ展開用容器の内壁に沿っ

ットなどを用いて，約10 mm以上の適切な間隔で直径2

てろ紙を巻き，ろ紙を展開溶媒で潤し，更に展開溶媒を

～ 6 mmの円形状又は幅4 ～ 10 mmの帯状にスポット

約10 mmの深さに入れ，展開用容器を密閉し，常温で約

し，風乾する．医薬品各条に規定する要件を満たす場合

1時間放置し，これに先の薄層板を器壁に触れないように

は，原線の位置及び原点の間隔を変更することができる． 入れ，容器を密閉し，常温で展開を行う．
(ⅱ) 展開溶媒による展開：通例，次の方法に従い，展開

展開溶媒の先端が原線から医薬品各条に規定する距離

溶媒を飽和させた展開用容器内で成分を分離させる．

まで上昇したとき，薄層板を取り出し，直ちに溶媒の先

あらかじめ少量の展開溶媒を入れた展開用容器の内壁

端の位置に印を付け，風乾した後，医薬品各条に規定す

に沿ってろ紙を入れ，ろ紙を展開溶媒で潤し，更に展開

る方法によって，それぞれのスポットの位置及び色など

溶媒を展開用容器の内底から約10 mmの深さまで入れ

を調べる．R f値は次の式によって求める．

る．展開用容器を密閉し，常温で約1時間放置し，展開用
容器に気化した展開溶媒を飽和させる．なお，ここに示

R f＝

原線からスポット中心までの距離
原線から溶媒先端までの距離

した以外の条件で調製した飽和展開容器を用いて展開す
る場合は別に規定する．薄層板をその上端以外が器壁に
触れないように置き，スポットが展開溶媒に浸かってい
ないことを確認後，容器を密閉し，常温で展開を行う．
展開溶媒が，必要とされる展開距離に上昇するまで放置
し，薄層板を取り出し，風乾する．なお，展開前に原線(原
点)に，また展開後に展開溶媒の先端に印を付ける．
(ⅲ) 可視化及び検出：展開終了後，薄層板上の被検成分
のスポットを可視化し，色調やR f値を確認する．通例，
展開後に薄層板を取り出し，風乾して，薄層板上で分離
したスポットを直接，又は発色試薬を均等に噴霧し試薬
を作用させて，薄層板上の被検成分を可視化し，目視で
検出を確認する．被検成分が紫外線吸収性を有する場合
は，蛍光剤(蛍光指示薬)入りの薄層板を用い，主波長254
nmの紫外線を照射することにより検出する．薄層板中の
蛍光指示薬は，主波長254 nmの紫外線の照射により励起
され，緑色系の蛍光を発する．被検成分のスポットは照
射光を吸収して蛍光指示薬の励起を減少させることによ
り蛍光指示薬からの放射発光を減少させ，蛍光の背景に
黒み(暗紫色)のスポットとして観察される．紫外線照射下
で励起され自ら蛍光を発する被検成分のスポットは，主
波長365 nmの紫外線を照射することにより蛍光指示薬
がなくても薄層板上で励起されて蛍光を発する．また，
適切な発色試薬の噴霧，液浸及び燻蒸により，被検成分

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備考