参考情報

19 .

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要な場合は，希釈直線性を確認し，試料を希釈することも可能

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粒子を使うことも，分析法の性能を評価するのに有効である．

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である．測定回数は装置の性能及び試料の特性を考慮し適切に

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なお，適切な機関により認証され，粒子径分布若しくは粒子数

3

設定する．

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が保証されている標準粒子を用いる．この他，屈折率が低いシ

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閾値は，分析結果に大きな影響を及ぼすので，閾値を個別に

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リカ粒子やポリメチルメタクリレート粒子は，タンパク質凝集

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設定できる装置を使用する場合は，事前に粒子境界が適切に認

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体のモデル粒子として適切な場合もあると考えられ，処方成分

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識されていることを確認する．その際，実試料若しくは実試料

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が試験対象試料と同様の溶液に添加した試料は，粒子と溶液の

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を劣化させた試料，又はタンパク質凝集体を模して作製された

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屈折率の差が小さいことで計測される粒子径が変動するか確認

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標準粒子などを使って，粒子の形状が正しく評価されているこ

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するのに有用と考えられる．

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と，ノイズを粒子として認識していないことも確認することが

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望ましい．なお，異なる閾値で取得したデータを比較する際は，

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フローイメージング法により微粒子数を計数する場合のバリデ

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閾値の差が測定結果に与える影響を十分に考慮する必要がある．

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3.

画像解析

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検出した粒子の粒子径は，円相当径(粒子の投影面積と等し

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い面積をもつ円の直径)にて示されることが多い．円相当径の

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ほかに，球相当径やフェレー径などが使用できるため，粒子径

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の比較には注意する必要がある．

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本参考情報はフローイメージング法による微粒子の計数を主

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な対象にしているが，粒子の画像から由来を推定することや，

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画像の特徴に応じて粒子を分類できる場合もある．画像解析の

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結果得られる，粒子の特性を表すパラメーターの主なものには，

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粒子径の他，面積，粒子周囲長，アスペクト比，円形度などの

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形状に関するパラメーターの他，明暗度や粒子内での明暗度の

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標準偏差といった光学的なパラメーターがある．これらのパラ

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メーターを使って，例えば，試料に含まれる粒子を，容器に由

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来するシリコーン油滴など由来ごとに分類することも可能であ

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る．シリコーン油滴との区別には，アスペクト比，真円度，周

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囲長，長さ，明暗度の平均値や標準偏差などが用いられる．各

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パラメーターを組み合わせ，最適な閾値を設定し，段階的にふ

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るい分ける．蓄積した十分な画像データを使って分類モデルを

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構築し，同じ装置で取得した画像データに適用することで，検

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出された粒子を由来ごとに分類することも可能と考えられる．

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ただし，これらのパラメーターは撮像装置や解析ソフトに組み

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込まれた定義式，画像解析装置のシステム及び測定条件に依存

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し，解像度や画素数，焦点の合わせ方によって測定値が異なる

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可能性のあること，由来の特定には顕微ラマン分光法など分子

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構造や組成情報の得られる適切な他の技術による分析が必要な

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ことに留意する．

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4.

分析法バリデーション

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分析法バリデーションでは一般に，真度，精度，特異性(選

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択性)などで表現される分析能パラメーターが，事前に定めた

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基準を満たしていることを実証することにより，分析法の妥当

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性が示される．評価すべき分析能パラメーターは，分析法が用

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いられる試験法の目的によって異なる．医薬品中の不溶性微粒

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子を計数する試験法の場合は，実試料を反映した真度既知の分

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析対象がなく，真度既知の分析法を使った評価が難しいこと，

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また製剤や原薬など実試料に含まれ得る微粒子は粒子径分布が

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広く均質ではないため，通常の定量試験と同様に分析法バリデ

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ーションを行うことは難しい．したがって，例えば，平均粒子

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径が値付けされたポリスチレン標準粒子や，粒子径と粒子濃度

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が値付けされたポリスチレン計数標準粒子を使って以下のバリ

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デーション手順例に示す分析能パラメーターを評価することで

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妥当性が示される．用いる標準粒子及び計数標準粒子の粒子濃

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度や粒子径は，実試料に含まれる粒子濃度や粒子径分布，規格

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値などを考慮して適切に設定する．粒子径の異なる複数の標準

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ーション手順例

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真度：5，10及び25 μmポリスチレン計数標準粒子を測定し，

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認証された粒子径及び粒子濃度の範囲内であることを確認する．

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精度：併行精度及び室内再現精度を評価する．併行精度は，

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微粒子を含まない水又は処方成分が試験対象試料と同様の溶液

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に，3水準の粒子濃度となるよう5，10及び25 μmの標準粒子

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を添加した試料について各々3回測定を繰り返すことにより求

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める．室内再現精度については，同様に調製した試料について，

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少なくとも試験日と試験者を変更した条件で測定を行って算出

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する．

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直線性：微粒子を含まない水又は処方成分が試験対象試料と

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同様の溶液に5，10及び25 μmの標準粒子を添加し，例えば5

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水準の粒子濃度について直線性を評価する．

77

特異性：モデルを使って粒子を分類するなどが必要な場合，

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実試料を劣化させた試料及び目的とする分析対象物を実試料に

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添加し，適切に分類できていることを確認する．

80

5.

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5.1.

装置性能の管理
校正

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フローイメージング法で算出される粒子径や粒子数は，標準

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粒子の測定値から算出される相対的な値ではなく，測定の原理

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に基づいた絶対的な値であるが，計数標準粒子を使って装置が

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正しく稼働していることを確認し，必要に応じて装置側の設定

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を調節する必要がある．光学系の確認は必須であり，焦点が正

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しく合っていること，光源の明るさが適切であることなどを確

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認する．また，ポンプの性能も測定結果に影響し得るため，流

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量の調節と流量確認を実施する．なお，装置校正には，適切な

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機関により認証され，絶対的な方法により粒子径分布及び粒子

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数が保証されているポリスチレン計数標準粒子及びポリスチレ

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ン標準粒子を用いる．

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5.2.

システム適合性

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測定実施前に装置の稼働状態が適切であること，適切に洗浄

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されていることを確認するため，以下のようなシステム適合性

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を設定することが推奨される．

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適切な標準粒子の測定値(粒子径及び粒子数)があらかじめ定

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めた範囲内にあることを確認する．フィルターを通した水(用

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時調製)で，粒子数が規定した値以下であることを確認する．

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粒子径の範囲は，目的に応じて適切な範囲とする．粒子数が適

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切な範囲内でなかった場合は，使用する水の調製及び装置の洗

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浄を繰り返し，再測定する．

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