第十八改正日本薬局方第二追補

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一般試験法

一般試験法の部

改正事項

2.03

薄層クロマトグラフィーの条 1.

器具及び装置以降を次のように改める．

2.03

薄層クロマトグラフィー

一般試験法

通例，以下の器具及び装置を用いる．

1 .

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像度を持つイメージスキャナを用いることもできる．なお，

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365 nm照射による蛍光スポットの記録時には，目視で確認で

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きる色調と記録の色調が異なる場合があることから，注意を要

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する．デンシトメトリーを用いる薄層クロマトグラフィー用走

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査装置は，紫外線による吸収，可視光による吸収又は励起光に

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よる蛍光を展開した薄層板上で測定し，得られたクロマトグラ

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ムをピーク情報に変換して記録・保存する．ピーク情報に変換

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されたデータは定量的な解析に使用される．

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2. 操作方法

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1. 器具及び装置

2.03 薄層クロマトグラフィー

別に規定するもののほか，通例，次の方法による．

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(ⅰ)

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び標準溶液を調製し，規定する容量を薄層板の原線上にスポッ

試料溶液のスポット：医薬品各条に規定する試料溶液及

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(ⅰ)

薄層板：薄層板は，平滑で均一な厚さのガラス板に一般

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トする．薄層板の下端から約20 mmの高さの位置を原線とし，

試験法 〈9.42〉に規定される薄層クロマトグラフィー用担体の

9

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試料溶液及び標準溶液などを左右両側から少なくとも10 mm

粉末をあらかじめ塗布したものである．医薬品各条に規定する

10

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離しスポットした位置を原点とする．定容量の毛細管，マイク

要件を満たす場合は，濃縮ゾーン付き薄層板，ガラス板の代わ

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ロシリンジ，マイクロピペットなどを用いて，約10 mm以上

りに硬質アルミニウムポリエステルシートなどを支持体に用い

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の適切な間隔で直径2 ～ 6 mmの円形状又は幅4 ～ 10 mmの

た薄層板を用いることができる．薄層板は湿気を避けて保存す

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る．必要に応じて，使用前に105 ～ 120℃の間の一定温度で

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帯状にスポットし，風乾する．医薬品各条に規定する要件を満

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30 ～ 60分間加熱，乾燥する．

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たす場合は，原線の位置及び原点の間隔を変更することができ

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(ⅱ)

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る．

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(ⅱ)

明な素材で作られた平底展開槽又は2槽式展開槽などを用いる． 70
展開用容器は薄層板の大きさに適した大きさのものを用いる．
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(ⅲ) 発色装置：発色試薬の噴霧には，ガラス製噴霧器，電動
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噴霧器などを用いる．被検成分の可視化のために，発色試薬を
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噴霧後，加熱装置を用いて薄層板を加熱する場合がある．加熱
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装置として，通例，恒温に設定したホットプレートを用いる．
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を飽和させた展開用容器内で成分を分離させる．

恒温器を用いる場合は，あらかじめ恒温とした金属プレート上

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展開容器を用いて展開する場合は別に規定する．薄層板をその

で薄層板を加熱する．また，液浸による発色及び気化した試薬

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上端以外が器壁に触れないように置き，スポットが展開溶媒に

蒸気にさらすこと(燻蒸)による可視化には，展開用容器やデシ

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浸かっていないことを確認後，容器を密閉し，常温で展開を行

ケーターなどが用いられる．

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(ⅳ) 検出装置：可視光，主波長254 nm及び365 nmの紫外線

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う．展開溶媒が，必要とされる展開距離に上昇するまで放置し，

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80

薄層板を取り出し，風乾する．なお，展開前に原線(原点)に，

を照射でき，対応するフィルターを備えた光源及び暗箱，又は

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また展開後に展開溶媒の先端に印を付ける．

これらの機能を備えた暗室などである．光源は，医薬品各条に

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(ⅲ)

規定する試験の要件に適合する必要がある．光源の適合性は，

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ポットを可視化し，色調や R f 値を確認する．通例，展開後に

放射強度について，光源を変更した際又は必要に応じて確認す

31

る．通例，蛍光剤入り薄層板に主波長254 nmを照射するとき

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薄層板を取り出し，風乾して，薄層板上で分離したスポットを

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直接，又は発色試薬を均等に噴霧し試薬を作用させて，薄層板

は，薄層板が緑色系の蛍光を発することを確認し，また，主波

33

長365 nmを照射するときは，例えば，5 μg/mLに調製した薄

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上の被検成分を可視化し，目視で検出を確認する．被検成分が

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紫外線吸収性を有する場合は，蛍光剤(蛍光指示薬)入りの薄層

層クロマトグラフィー用スコポレチンのメタノール溶液を薄層

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板に2 μLスポットしたものが，青白色の蛍光を発することを

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板を用い，主波長254 nmの紫外線を照射することにより検出

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確認する．紫外線波長領域の中で365 nm付近に安定した放射

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する．薄層板中の蛍光指示薬は，主波長254 nmの紫外線の照

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強度を持つ高照度光源には，365 nmに幅の狭い線スペクトル

90

射により励起され，緑色系の蛍光を発する．被検成分のスポッ

38

を持つランプと，これより放射信号の強い366 nm (364 ～ 367

91

トは照射光を吸収して蛍光指示薬の励起を減少させることによ

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nmの範囲)に線スペクトルを持つランプが存在する．使用する

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り蛍光指示薬からの放射発光を減少させ，蛍光の背景に黒み

40

ランプにより光源及び波長の規格表記は異なるが，366 nmの

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(暗紫色)のスポットとして観察される．紫外線照射下で励起さ

41

光源ランプを紫外線(主波長365 nm)の照射の光源として扱う

94

れ自ら蛍光を発する被検成分のスポットは，主波長365 nmの

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紫外線を照射することにより蛍光指示薬がなくても薄層板上で

ことができる．

43

(ⅴ)

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励起されて蛍光を発する．また，適切な発色試薬の噴霧，液浸

クロマトグラムの記録装置：検出装置に付加される撮影

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及び燻蒸により，被検成分のスポットを可視化することができ

装置は，記録のための写真を撮影するために使用され，試験の

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る．発色試薬によっては，噴霧後更に加熱することで可視化さ

実施に適した感度，解像度及び再現性を必要とする．カメラで

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れることもある．噴霧後又は噴霧加熱後に主波長365 nmの紫

撮影し，フィルム画像又は電子画像の形式で記録・保存する．

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外線を照射することにより，特徴的な蛍光を発することもある．

可視光下で検出したクロマトグラムの色調を記録する場合は，

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なお，展開操作及び発色試薬による可視化は，換気が十分でき，

基準となる色見本を同時に撮影することが望ましく，十分な解

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溶媒蒸気などを効率的に除去できるドラフトチャンバー装置な

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展開用容器：通例，展開用容器は蓋のできる不活性で透

展開溶媒による展開：通例，次の方法に従い，展開溶媒

あらかじめ少量の展開溶媒を入れた展開用容器の内壁に沿っ
てろ紙を入れ，ろ紙を展開溶媒で潤し，更に展開溶媒を展開用
容器の内底から約10 mmの深さまで入れる．展開用容器を密
閉し，常温で約1時間放置し，展開用容器に気化した展開溶媒
を飽和させる．なお，ここに示した以外の条件で調製した飽和

可視化及び検出：展開終了後，薄層板上の被検成分のス

日本薬局方の医薬品の適否は，その医薬品各条の規定，通則，生薬総則，製剤総則及び一般試験法の規定によって判定する． (通則5参照 )