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資料No.1-1～1-5_第十八改正日本薬局方第二追補（案） (41 ページ)
出典
| 公開元URL | https://www.mhlw.go.jp/stf/shingi2/0000174942_00008.html |
| 出典情報 | 薬事・食品衛生審議会 日本薬局方部会（令和5年度第1回 1／22）《厚生労働省》 |
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第十八改正日本薬局方第二追補
テセロイキン(遺伝子組換え)
13 .
1
アントブルーG－250を含む液に浸して染色する．その後，
53
により測定し，次式により二量体の量を求めるとき，1.0％
54
以下である．
2
脱色してバンドを検出する．テセロイキン用分子量マーカー
3
から得たバンドの移動距離を求め，分子量1.0 × 104 ～ 2.5
4
× 104の範囲で分子量の対数に対して直線回帰し，検量線を
5
作成する．試料溶液から得た主バンドの中心部の相対移動度
6
を求め，検量線より本品の分子量を求めるとき1.40 × 10
7
～ 1.60 × 104である．
4
8
純度試験
9
(１)
10
を含む液となるように水を加え，試料溶液とする．この液
11
1.2 mLにつき，次の条件で液体クロマトグラフィー〈2.01〉
12
により試験を行う．テセロイキンのピーク面積 A2 及びテセ
13
ロイキンに対する相対保持時間約0.8のデスメチオニル体の
14
ピーク面積 A1 を自動積分法により測定し，次式によりデス
15
メチオニル体の量を求めるとき，1.0％以下である．
16
デスメチオニル体の量(％)＝A1／(A1 ＋ A2) × 100
17
デスメチオニル体
本品1 mLにタンパク質約0.5 mg
試験条件
18
検出器：紫外吸光光度計(測定波長：280 nm)
19
カラム：内径7.5 mm，長さ7.5 cmのステンレス管に10
20
μmの液体クロマトグラフィー用ジエチルアミノエチル
21
基を結合した合成高分子を充塡し，そのカラム2本を直
22
列に接続する．
23
カラム温度：25℃付近の一定温度
24
移動相A：ジエタノールアミン0.66 gを水400 mLに混和し，
25
1 mol/L塩酸試液を加えてpH 9.0に調整した後，水を加
56
二量体の量(％)＝A1／(A1 ＋ A2) × 100
試験条件
57
検出器：紫外吸光光度計(測定波長：220 nm)
58
カラム：内径7.5 mm，長さ60 cmのステンレス管に10
59
μmの液体クロマトグラフィー用グリコールエーテル化
60
シリカゲルを充塡する．
61
カラム温度：25℃付近の一定温度
62
移動相：ラウリル硫酸ナトリウム1.0 gをpH 7.0の0.1
63
mol/Lリン酸ナトリウム緩衝液に溶かし，1000 mLとす
64
65
る．
流量：テセロイキンの保持時間が30 ～ 40分になるように
66
調整する．
67
システム適合性
68
システムの性能：炭酸脱水酵素1 mg及びα－ラクトアル
69
ブミン1 mgを水20 mLに溶かした液1容量に，0.2％ラ
70
ウリル硫酸ナトリウム試液1容量を加える．この液20
71
μLにつき，上記の条件で操作するとき，炭酸脱水酵素，
72
α－ラクトアルブミンの順に溶出し，その分離度は1.5
73
以上である．
74
システムの再現性：試料溶液の適量を正確に量り，移動相
75
を加えて正確に200倍に希釈する．この液20 μLにつき，
76
上記の条件で試験を3回繰り返すとき，テセロイキンの
77
ピーク面積の相対標準偏差は7％以下である．
78
(４)
移動相B：pH 7 ～ 9用両性担体液2 mL及びpH 8 ～ 10.5
79
件で液体クロマトグラフィー 〈2.01〉 により試験を行い，
26
27
55
えて500 mLとする．
その他の異種タンパク質
本品5 μLにつき，次の条
28
用両性担体液5 mLに水1500 mLを加え，1 mol/L塩酸試
80
各々のピーク面積を自動積分法により測定する．面積百分率
29
液を加えてpH 7.0に調整した後，水を加えて2000 mL
81
法によりそれらの量を求めるとき，テセロイキン及び溶媒以
30
とする．
82
外のピークの合計量は1.0％以下である．
31
移動相の切換え及び試料注入方法：移動相Aを送液しなが
83
試験条件
32
ら試料溶液を注入する．試料溶液は100 μLずつ12回繰
84
検出器：紫外吸光光度計(測定波長：220 nm)
33
り返し注入する．全量注入後，60分間移動相Aを送液し
85
カラム：内径4.6 mm，長さ15 cmのステンレス管に5
34
た後，移動相Bを送液する．試料溶液を測定した後，カ
86
μmの液体クロマトグラフィー用オクタデシルシリル
35
ラムの後処理及び洗浄のために，1 mol/L塩化ナトリウ
87
化シリカゲルを充塡する．
36
ム試液を10分間送液した後，移動相Aを送液しながら水
88
カラム温度：25℃付近の一定温度
37
酸化ナトリウム試液100 μLを注入し，55分後に次の試
89
移動相A：トリフルオロ酢酸試液
移動相B：トリフルオロ酢酸の液体クロマトグラフィー
38
料溶液の注入を開始する．保持時間は，移動相Bに切り
90
39
換えた時点から測定する．
91
40
41
流量：毎分 0.8 mL
93
システム適合性
42
システムの性能：ウマ心臓由来で等電点が6.76及び7.16の
43
2種ミオグロビンの混合物を水に溶かし，約0.5 mg/mL
44
の濃度とする．この液200 μL，本品200 μL及び水2.74
45
mLを混和する．この液1.2 mLにつき，上記の条件で操
46
作するとき，ミオグロビン，テセロイキンの順に溶出し，
47
92
その分離度は1.5以上である．
用アセトニトリル溶液(1→1000)
移動相の送液：移動相A及び移動相Bの混合比を次のよ
うに変えて濃度勾配制御する．
注入後の時間
(分)
0～ 2
2 ～ 28
28 ～ 32
94
移動相A
(vol％)
55
55 →
0
0
移動相B
(vol％)
45
45 →
100
100
流量：0.5 mL/分
48
(２)
本品1容量に0.2％ラウリル硫酸ナトリウム試
95
49
液1容量を加え，試料溶液とする．この液20 μLにつき，次
96
50
の条件で液体クロマトグラフィー 〈2.01〉 により試験を行う．
97
検出の確認：薄めた酢酸(100) (3→1000) 990 μLを量り，
51
テセロイキンのピーク面積 A2 及びテセロイキンに対する相
98
本品10 μLを正確に加え，システム適合性試験用原液
52
対保持時間0.8 ～ 0.9の二量体のピーク面積A1を自動積分法
99
とする．薄めた酢酸(100) (3→1000) 800 μLを正確に
二量体
面積測定範囲：テセロイキンの保持時間の約2倍の範囲
システム適合性
日本薬局方の医薬品の適否は，その医薬品各条の規定，通則，生薬総則，製剤総則及び一般試験法の規定によって判定する．(通則5参照 )
テセロイキン(遺伝子組換え)
13 .
1
アントブルーG－250を含む液に浸して染色する．その後，
53
により測定し，次式により二量体の量を求めるとき，1.0％
54
以下である．
2
脱色してバンドを検出する．テセロイキン用分子量マーカー
3
から得たバンドの移動距離を求め，分子量1.0 × 104 ～ 2.5
4
× 104の範囲で分子量の対数に対して直線回帰し，検量線を
5
作成する．試料溶液から得た主バンドの中心部の相対移動度
6
を求め，検量線より本品の分子量を求めるとき1.40 × 10
7
～ 1.60 × 104である．
4
8
純度試験
9
(１)
10
を含む液となるように水を加え，試料溶液とする．この液
11
1.2 mLにつき，次の条件で液体クロマトグラフィー〈2.01〉
12
により試験を行う．テセロイキンのピーク面積 A2 及びテセ
13
ロイキンに対する相対保持時間約0.8のデスメチオニル体の
14
ピーク面積 A1 を自動積分法により測定し，次式によりデス
15
メチオニル体の量を求めるとき，1.0％以下である．
16
デスメチオニル体の量(％)＝A1／(A1 ＋ A2) × 100
17
デスメチオニル体
本品1 mLにタンパク質約0.5 mg
試験条件
18
検出器：紫外吸光光度計(測定波長：280 nm)
19
カラム：内径7.5 mm，長さ7.5 cmのステンレス管に10
20
μmの液体クロマトグラフィー用ジエチルアミノエチル
21
基を結合した合成高分子を充塡し，そのカラム2本を直
22
列に接続する．
23
カラム温度：25℃付近の一定温度
24
移動相A：ジエタノールアミン0.66 gを水400 mLに混和し，
25
1 mol/L塩酸試液を加えてpH 9.0に調整した後，水を加
56
二量体の量(％)＝A1／(A1 ＋ A2) × 100
試験条件
57
検出器：紫外吸光光度計(測定波長：220 nm)
58
カラム：内径7.5 mm，長さ60 cmのステンレス管に10
59
μmの液体クロマトグラフィー用グリコールエーテル化
60
シリカゲルを充塡する．
61
カラム温度：25℃付近の一定温度
62
移動相：ラウリル硫酸ナトリウム1.0 gをpH 7.0の0.1
63
mol/Lリン酸ナトリウム緩衝液に溶かし，1000 mLとす
64
65
る．
流量：テセロイキンの保持時間が30 ～ 40分になるように
66
調整する．
67
システム適合性
68
システムの性能：炭酸脱水酵素1 mg及びα－ラクトアル
69
ブミン1 mgを水20 mLに溶かした液1容量に，0.2％ラ
70
ウリル硫酸ナトリウム試液1容量を加える．この液20
71
μLにつき，上記の条件で操作するとき，炭酸脱水酵素，
72
α－ラクトアルブミンの順に溶出し，その分離度は1.5
73
以上である．
74
システムの再現性：試料溶液の適量を正確に量り，移動相
75
を加えて正確に200倍に希釈する．この液20 μLにつき，
76
上記の条件で試験を3回繰り返すとき，テセロイキンの
77
ピーク面積の相対標準偏差は7％以下である．
78
(４)
移動相B：pH 7 ～ 9用両性担体液2 mL及びpH 8 ～ 10.5
79
件で液体クロマトグラフィー 〈2.01〉 により試験を行い，
26
27
55
えて500 mLとする．
その他の異種タンパク質
本品5 μLにつき，次の条
28
用両性担体液5 mLに水1500 mLを加え，1 mol/L塩酸試
80
各々のピーク面積を自動積分法により測定する．面積百分率
29
液を加えてpH 7.0に調整した後，水を加えて2000 mL
81
法によりそれらの量を求めるとき，テセロイキン及び溶媒以
30
とする．
82
外のピークの合計量は1.0％以下である．
31
移動相の切換え及び試料注入方法：移動相Aを送液しなが
83
試験条件
32
ら試料溶液を注入する．試料溶液は100 μLずつ12回繰
84
検出器：紫外吸光光度計(測定波長：220 nm)
33
り返し注入する．全量注入後，60分間移動相Aを送液し
85
カラム：内径4.6 mm，長さ15 cmのステンレス管に5
34
た後，移動相Bを送液する．試料溶液を測定した後，カ
86
μmの液体クロマトグラフィー用オクタデシルシリル
35
ラムの後処理及び洗浄のために，1 mol/L塩化ナトリウ
87
化シリカゲルを充塡する．
36
ム試液を10分間送液した後，移動相Aを送液しながら水
88
カラム温度：25℃付近の一定温度
37
酸化ナトリウム試液100 μLを注入し，55分後に次の試
89
移動相A：トリフルオロ酢酸試液
移動相B：トリフルオロ酢酸の液体クロマトグラフィー
38
料溶液の注入を開始する．保持時間は，移動相Bに切り
90
39
換えた時点から測定する．
91
40
41
流量：毎分 0.8 mL
93
システム適合性
42
システムの性能：ウマ心臓由来で等電点が6.76及び7.16の
43
2種ミオグロビンの混合物を水に溶かし，約0.5 mg/mL
44
の濃度とする．この液200 μL，本品200 μL及び水2.74
45
mLを混和する．この液1.2 mLにつき，上記の条件で操
46
作するとき，ミオグロビン，テセロイキンの順に溶出し，
47
92
その分離度は1.5以上である．
用アセトニトリル溶液(1→1000)
移動相の送液：移動相A及び移動相Bの混合比を次のよ
うに変えて濃度勾配制御する．
注入後の時間
(分)
0～ 2
2 ～ 28
28 ～ 32
94
移動相A
(vol％)
55
55 →
0
0
移動相B
(vol％)
45
45 →
100
100
流量：0.5 mL/分
48
(２)
本品1容量に0.2％ラウリル硫酸ナトリウム試
95
49
液1容量を加え，試料溶液とする．この液20 μLにつき，次
96
50
の条件で液体クロマトグラフィー 〈2.01〉 により試験を行う．
97
検出の確認：薄めた酢酸(100) (3→1000) 990 μLを量り，
51
テセロイキンのピーク面積 A2 及びテセロイキンに対する相
98
本品10 μLを正確に加え，システム適合性試験用原液
52
対保持時間0.8 ～ 0.9の二量体のピーク面積A1を自動積分法
99
とする．薄めた酢酸(100) (3→1000) 800 μLを正確に
二量体
面積測定範囲：テセロイキンの保持時間の約2倍の範囲
システム適合性
日本薬局方の医薬品の適否は，その医薬品各条の規定，通則，生薬総則，製剤総則及び一般試験法の規定によって判定する．(通則5参照 )